載體保藏法

是將微生物吸附在適當的載體，如土壤、沙子、硅膠、濾紙上，而后進行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和濾紙保藏法應用相當廣泛。

載體保藏法操作步驟

1．濾紙保藏法

（1）將濾紙剪成0．5×1．2cm 的小條，裝入0．6×8cm 的安瓿管中，每管1—2 張，塞以棉塞，1．05kg/cm2>，121．3℃** 30 分鐘。

（2）將需要保存的菌種，在適宜的斜面培養基上培養，使充分生長。

（3）取**脫脂牛乳1—2ml 滴加在**培養皿或試管內，取數環菌苔在牛乳內混勻，制成濃懸液。

（4）用**鑷子自安瓿管取濾紙條浸入菌懸液內，使其吸飽，再放回至安瓿管中，塞上棉塞。

（5）將安瓿管放入內有五氧化二磷作吸水劑的干燥器中，用真空泵抽氣至干。

（6）將棉花塞入管內，用火焰熔封，保存于低溫下。

（7）需要使用菌種，復活培養時，可將安瓿管口在火焰上燒熱，滴一滴冷水在燒熱的部位，使玻璃破裂，再用鑷子敲掉口端的玻璃，待安瓿管開啟后，取出濾紙，放入液體培養基內，置溫箱中培養。

**、酵母菌、絲狀**均可用此法保藏，前兩者可保藏2 年左右，有些絲狀**甚至可保藏14—17 年之久。此法較液氮、冷凍干燥法簡便，不需要特殊設備。

2．沙土保藏法

（1）取河沙加入10％稀**，加熱煮沸30 分鐘，以去除其中的有機質。

（2）倒去酸水，用自來水沖洗至中性。

（3）烘干，用40 目篩子過篩，以去掉粗顆粒，備用。

（4）另取非耕作層的不含腐植質的瘦黃土或紅土，加自來水浸泡洗滌數次，直至中性。

（5）烘干，碾碎，通過100 目篩子過篩，以去除粗顆粒。

（6）按一份黃土、三份沙的比例（或根據需要而用其他比例，甚至可全部用沙或全部用土）摻合均勻，裝入10×100mm的小試管或安瓿管中，每管裝1g 左右， 塞上棉塞，進行**，烘干。

（7）抽樣進行無菌檢查，每10 支沙土管抽一支，將沙土倒入肉湯培養基中，37℃培養 48 小時，若仍有雜菌，則需全部重新**，再作無菌試驗，直至證明無菌，方可備用。

（8）選擇培養成熟的（一般指孢子層生長豐滿的，營養細胞用此法效果不好） 優良菌種，以無菌水洗下，制成孢子懸液。

（9）于每支沙土管中加入約0．5ml（一般以剛剛使沙土潤濕為宜）孢子懸液， 以接種針拌勻。

（10）放入真空干燥器內，用真空泵抽干水分，抽干時間越短越好，務使在12小時內抽干。

（11）每10 支抽取一支，用接種環取出少數沙粒，接種于斜面培養基上，進行培養，觀察生長情況和有無雜菌生長，如出現雜菌或菌落數很少或根本不長，則說明制作的沙土管有問題，尚須進一步抽樣檢查。

（12）若經檢查沒有問題，用火焰熔封管口，放冰箱或室內干燥處保存。每半年檢查一次活力和雜菌情況。

（13）需要使用菌種，復活培養時，取沙土少許移入液體培養基內，置溫箱中培養。

此法多用于能產生孢子的微生物如霉菌、放線菌，因此在***工業生產中應用*廣，效果亦好，可保存2 年左右，但應用于營養細胞效果不佳。