計數法的檢驗

計數方法包括平皿法和薄膜過濾法。檢查時，按已驗證的計數方法進行供試品的**、霉菌及酵母菌菌數的測定。

1.平皿法

常規法和培養基稀釋法都是平皿法。供試液通過離心沉淀以后也可用平皿法檢查。

采用平皿法進行菌數測定時，應取適宜的連續2~3個稀釋級的供試液。取供試液1ml，置直徑 90mm 的無菌平皿中（培養基稀釋法，則將 1ml供試液均勻分注入2個或以上的平皿中），注入15~20ml溫度不超過45℃的溶化的營養瓊脂培養基或玫瑰紅鈉瓊脂培養基或酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養基，混人，凝固。倒置培養。每稀釋級每種培養基至少制備2個平板。

陰性對照試驗 取試驗用的稀釋液 lml，置無菌平皿中，注入培養基，凝固，倒置培養。每種計數用的培養基各制備2個平板，均不得有菌生長。

培養和計數 除另有規定外，**培養 48 小時，逐日點計菌落數，一般以 48小時的菌落數報告∶霉菌、酵母菌培養 72.小時，逐日點計菌落數，般以72 小時的菌落數報告;必要時，可適當延長培養時間至5~7天進行菌落汁數并報告。菌落蔓延生長成片的平板不宜計數。點計菌落數后，計算各稀釋級供試液的平均菌落數，按菌數報告規則報告菌數。若同稀釋級兩個平板的菌落平均數不小于 15，則兩個平板的菌落數不能相差1倍或以上。

一般營養瓊脂培養基用士**計數∶ 改瑰紅鋼瓊脂培養基用干霉菌及酵母菌計數;酵母浸出粉胨陳葡萄糖瓊脂培養基用干酵母菌計數。在特殊情況下， 若營養瓊脂培養基上長有霉菌和酵母菌、玫瑰紅鈉瓊脂培養基上長有**，則應分別點汁霉菌和酵母菌、**菌落數。然后將營養瓊脂培養基上的霉菌和酵母菌數或玫瑰紅鈉瓊脂培養基上的**數，與玫現紅鈉瓊脂培養基中的霉菌和整母菌數或營養瓊脂培養基中的**數進行比較，以菌落數高的培養基中的菌數為計數結果。

 含蜂蜜、王漿的液體制劑，用玫瑰紅鈉瓊脂培養基測定霉菌數，用酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養基測定酵母菌數，合并計數。

菌數報告規則 宜選取**、酵母菌平均菌落數在 30～300 之間、霉菌平均菌落數在 30～100 之間的稀釋級，作為菌數報告（取兩位有效數字）的依據。

（1）當僅有1個稀釋級的菌落數符合上述規定，以該級的平均菌落數乘以稀釋倍數的值報告菌數。

（2）當同時有 2個稀釋級的菌落數符合上述規定時，視兩者比值（比值為高稀釋級的菌落數乘以稀釋倍數的值除以低稀釋級的菌落數乘以稀釋倍數的值）而定。若比值不大于2，以兩稀釋級的菌落數乘以稀釋倍數的均值報告菌數;若比值大于2但不超過5時，以低稀釋級的菌落數乘以稀釋倍數的值報告菌數;當出現比值大于5，或高稀釋級的菌落數大于或等于低稀釋級的菌落數等異常情況時，應查明原因再行檢查，稀釋級的菌落數大于或等于低稀釋級的菌落數等異常情況時，應查明原因再行檢查，必要時，應進行方法的重新驗證。

（3）當各稀釋級的平均菌落數均小于 30，以*低稀釋級的平均菌落數乘以稀釋倍數的值報告菌數。

（4）如各稀釋級的平板均無菌落生長，或僅*低稀釋級的平板有菌落生長，

但平均菌落數小于1時，以<1乘以*低稀釋倍數的值報告菌數。

薄膜過濾法

采用薄膜過濾法，濾膜孔徑應不大于0.45μm，直徑約為 50mm。選擇濾膜材質時應保證供試品及其溶劑不影響微生物的充分被截留。濾器及濾膜使用前應采用適宜的方法**。使用時，應保證濾膜在過濾前后的完整性。水溶性供試液過濾前先將少量的沖洗液過濾以潤濕濾膜。油類供試品，其濾膜和過濾器在使用前應充分干燥。為發揮濾膜的*大過濾效率，應注意保持供試品溶液及沖洗液覆蓋整個濾膜表面。供試液經薄膜過濾后，若需要用沖洗液沖洗濾膜，每張濾膜每次沖洗量為100ml。每片濾膜的總過濾量不宜過大，以避免濾膜上的微生物受損傷。

操作步驟

取相當于每張濾膜含 1g 或lml供試品的供試液，加至適量的稀釋劑中，混勻，過濾。若供試品每 1g 或 Iml 所含的菌數較多時，可取適宜稀釋級的供試液 lml，過濾。用pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或其他適宜的沖洗液沖洗濾膜，沖洗方法和沖洗量同"計數方法的驗證"。沖洗后取出濾膜，菌面朝上貼于營養瓊脂培養基或玫瑰紅鈉瓊脂培養基或酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養基平板上培養。每種培養基至少制備一張濾膜。

陰性對照試驗 取試驗用的稀釋液lml照上述薄膜過濾法操作，作為陰性對照。陰性對照不得有菌生長。

培養和計數 培養條件和計數方法同平皿法，每片濾膜上的菌落數應不超過 100 個。

菌數報告規則 以相當于1g 或 lml供試品的菌落數報告菌數;若濾膜上無菌落生長，以＜1報告菌數（每張濾膜過濾1g或1ml供試品），或＜1乘以*低稀釋倍數的值報告